Shi و همکاران در سال ۲۰۰۳، ترکیبات آنتی­اکسیدان با خنثی نمودن رادیکال های آزاد، جلوی تخریب سلولی ناشی از اثر رادیکال­های آزاد را می­گیرند.
Faria و همکاران در سال ۲۰۰۶، بسیاری از اثرات بهداشتی مفید GSE به مهار خواص آنتی­اکسیدانی و رادیکال­های آزاد نسبت دادند.
Yousef و همکاران در سال ۲۰۰۷، عصاره هسته انگور باعث می­ شود روند استروئیدوژنز و از این رو تولید تستوسترون و تولید اسپرم بهبود یافته و از این رو باروری افزایش پیدا کند.
Ljubuncic و همکاران در سال ۲۰۰۵ میوه زالزالک را به عنوان یک منبع غنی از آنتی اکسیدانت­ها برشمرده­اند.
Yao و همکاران در سال ۲۰۰۸ گزارش کردند که اغلب فعالیت­های دارویی زالزالک به فلاونوئیدها و پروآنتوسیانیدین­های اولیگومریک موجود در آن نسبت داده می­ شود .
Khalil و همکاران در سال ۲۰۰۸ نشان داده­اند که گونه­ های متعددی از زالزالک دارای خواص کاهندگی چربی خون در حیوانات آزمایشگاهی می­باشند.
*فصل دوم
مواد و روش­ها
۱-۲) مواد:
-محیط کشت mR1ECM برای تهیه­ رقت مناسب از اسپرم

- رنگ ائوزین-نگروزین جهت رنگ­آمیزی اسپرم­های زنده و مرده
- محلول فرمالین ۱۰% جهت فیکس نمودن بافت بیضه موش­ها
- داروی سیکلوسپورین بصورت کپسول
- رنگ ائوزین
- رنگ هماتوکسیلین
- الکل اتیلیک مطلق و ۹۶ درجه
- محلول گزیلل (زایلین)
- محلول آلبومین
- گلیسرول
- چسب انتالان
- کربنات لیتیم
- پارافین
- محلول اسید- الکل
- محلول کلروفریک
۲-۲) وسایل و دستگاه­ها
-ترازوی حساس برای توزین رت­ها و دارو­ها
- سرنگ انسولین ۱۰۰ واحدی جهت گاواژ دارو
- انکوباتور co₂
- ست جراحی
- سمپلر برای برداشتن نمونه و انتقال آن به لوله­های آزمایش
- دستگاه سانتریفوژ
- لام و لامل
- قلم الماس
- میکروتوم
- قالب­های پارافین و کرایوستات
- ظروف مخصوص رنگ­آمیزی
- عدسی مدرج و مشبک
۳-۲) آماده ­سازی عصاره­های آبی
۱-۳-۲) تهیه عصاره هسته انگور
انگور قرمز از باغ­های اطراف شهرستان ارومیه تهیه و پس از شستن و خشک کردن، هسته­ها از میوه جدا و آسیاب شدند. مقدار ۲۵ گرم پودر هسته انگور به ۲۵۰ میلی­لیتر آب مقطر اضافه و به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۴۰ درجه سانتی گراد در انکوباتور نگهداری شد. روزانه به مدت ۳ ساعت بر روی دستگاه روتاتور با ۲۰۰ دور در دقیقه چرخانده و بعد با کاغذ صافی واتمن شماره یک فیلتر و سپس حلال محلول فیلتر شده، با دستگاه تبخیر کننده چرخان تبخیر شد و عصاره خشک بدست آمد. این عمل ۳ بار تکرار شد و کل نمونه ها جمع آوری و در یخچال تا زمان انجام آزمایش در دمای ۲۰- نگهداری شد (Harborne, 1998).
۲-۳-۲) طرز تهیه عصاره زالزالک
برای این منظور ، میوه­های زالزالک پس از جمع­آوری از مناطق رشد آن در اطراف شهرستان ارومیه و تایید توسط بخش گیاه­شناسی دانشکده علوم دانشگاه ارومیه، به مدت ۱۰ روز در دمای آزمایشگاه و دور از نور مستقیم آفتاب، خشک و آسیاب گردیدند. سپس ۲۵ گرم از پودر به دست آمده در ۲۵۰ میلی لیتر آب مقطر به مدت ۱۵ دقیقه در دمای ۱۰۰ درجه سانتی ­گراد جوشانده شده، جوشانده حاصل با بهره گرفتن از کاغذ صافی­های معمولی و متعاقبا کاغذ صافی واتمن (Whatman) شماره یک صاف می­گردید. این جوشانده صاف شده نیز در دستگاه حذف حلال، تحت شرایط خلاء و در دمای ۵۶ درجه سانتی گراد تغلیظ می­گردید. پس از تغلیظ نهایی و خشک شدن، عصاره آبی نهایی به ۴/۱۲% وزن اولیه رسید. این عصاره آبی تهیه شده نیز تا زمان مصرف در دمای ۱۸- سانتی گراد نگهداری می­شد (Ljubuncic et al., 2005).
۴-۲) حیوانات
در این تحقیق از ۳۲ رت نر بالغ نژاد Wistar در محدوده وزنی ۲۰±۲۰۰ گرم جهت انجام آزمایشات استفاده گردید. حیوانات در خانه حیوانات گروه زیست شناسی دانشکده علوم دانشگاه ارومیه تحت شرایط استاندارد (۱۲ ساعت روشنایی و ۱۲ ساعت تاریکی ) و درجه حرارت ۲± ۲۲درجه سانتیگراد در قفس­های مخصوص پرورش و نگهداری می­شدند. این حیوانات توسط پلیت تغذیه شده و جهت آبدهی از شیر آب شهری استفاده می­شد.
۵-۲) تعیین حیوانات و دوز مؤثر دارو
موش­های نر حدود دو ماه پس از تولد بالغ می­شوند و قادر به تولید حداکثراسپرم روزانه و بارور­کردن موش های ماده می­شوند. در رت ماده نیز ۵۰-۷۰ روز پس از تولد بلوغ جنسی اتفاق می­افتد. بررسی مطالعات پیشین بر روی سیکلوسپورین­آ نشان می دهد که تیمار سیکلوسپورین با دوز mg/kg/day40 باعث اختلال در باروری رت­ها می­ شود (Hiroshi et al., 2003). بنابراین میزان دوز تجویزی mg/kg/day40 انتخاب شد (بصورت محلول در نیم سی­سی روغن کنجد) . میزان دوز تجویزی عصاره زالزالک ((Max et al., 2003 و عصاره هسته انگور(میرزایی ع و همکاران.، ۱۳۹۰) mg/kg/day150انتخاب شد.
۶-۲) گروه بندی حیوانات
۳۲سر رت نر بالغ به طور تصادفی به ۴ گروه ۸ تایی تقسیم شدند و به صورت زیر تحت رژیم دارویی قرار گرفتند:
حیوانات گروه اول جهت حذف استرس تزریق به عنوان گروه کنترل در نظر گرفته شدند. این گروه بجز آب و غذا ترکیب دیگری دریافت نکردند.
حیوانات گروه دوم بمدت۴۵ روز ، روزی یک بار دارو ی سیکلوسپورین را به صورت گاواژ دریافت کردند.
حیوانات گروه سوم به مدت ۴۵ روز ، روزی یک بار داروی سیکلوسپورین را به همراه عصاره هسته انگور به صورت گاواژ دریافت می کردند.
حیوانات گروه چهارم به مدت ۴۵ روز، روزی یک بار داروی سیکلوسپورین را به همراه عصاره زالزالک به صورت گاواژ دریافت می­کردند.
۷-۲) بررسی­های بافت­شناسی
قبل از شروع آزمایش و گاواژ دارو، رت­های نر بالغ به مدت ۱۴ روز در مرکز پرورش و نگهداری حیوانات آزمایشگاهی درکنار هم و به صورت گروه­بندی شده قرار داده شدند تا با شرایط محیط سازش پیدا کنند و استرس­های محیطی بر نتیجه آزمایش­ها هیچگونه تأثیری نداشته باشد. در پایان دوره تیمار (۱۸ روز پس از آخرین تزریق)، رت ها به روش جابجایی مهره­های گردن آسان کشی شد. بیضه سمت چپ را پس از پاساژ بافتی با H&E و PAS رنگ آمیزی نموده و بیضه سمت سمت راست را جهت مطالعات هیستوشیمیایی و هیستومورفومتری به کرایواستات انتقال داده شد و پس از تهیه مقاطع کرایواستات با سودان بلاک رنگ­آمیزی شدند و از آنها تصاویری با دوربین دیجیتالی تهیه و مورد مطالعه قرار­گرفتند.
۸-۲) روش تهیه محلول ثبوتی فرمالین ١٠درصدی نمکی
کلرید سدیم ٩گرم
آلدئید فرمیک ١٠٠میلی لیتر
آب مقطر ٩٠٠ میلی لیتر