S
S
S
S
S
۵۱۷
S
S
S
S
S
S
۳۰۷
S
S
S
S
S
S
R: Resistance
S: Sensitive
۴-۷. نتایج تعیین غلظت پروتئینها
پس از اینکه مرحله استخراج پروتئینها به پایان رسید، پروتئینها تعیین غلظت گردید. برای این کار از روش برادفورد، به وسیله دستگاه اسپکتوفوتومتر با طول موج ۵۹۵ نانومتر استفاده شد. قبل از آن باید منحنی استاندارد را رسم نمود. از پروتئین آلبومین سرم گاوی به عنوان پروتئین استاندارد جهت سنجش غلطت استفاده شد، به نحوی که ۱ این پروتئین آماده گردید و برای صحت این مقدار، توسط دستگاه اسپکتوفوتومتر در طول موج ۲۸۰ نانومتر جذب مشاهده شد، سپس رقتهای مختلف از آن آماده گردید و با روش برادفورد آنها تعیین غلظت شد. بدین ترتیب منحنی استاندارد ترسیم و جذب نوری ترکیب مجهول قرائت شد و در منحنی استاندارد قرار گرفت و بدین ترتیب غلظت مجهول تعیین شد.
از دستگاه اسپکتروفتومتر مدلspectrophotometer JENWAY 6305 استفاده شد. استاندارد سازی با پروتئین آلبومین انجام شد، غلظت پروتئین استاندارد با کمک فاکتور XF در دستگاه ثبت شد و سپس غلظت نمونههای مجهول در طول موجهای ۲۸۰ و ۵۹۵ نانومتر سنجیده شد.
غلظت پروتئینهای غشایی بین ۷۰-۴۰ میلیگرم بر میلیلیتر و غلظت پروتئینهای ترشحی بین ۵-۱ میلی گرم بر میلیلیتر گزارش شد.
نمودار۴-۲: منحنی استاندارد
۴-۸. نتایج مربوط به تفکیک پروتئینها بر اساس وزن مولکولی
جهت جداسازی پروتئینها از ژل پلی اکریل امید با غلظتهای مختلف ۱۰% و ۵/۱۲% و ضخامت ۱ میلی متر استفاده شده، طی محاسبات حدود ۲۵ میکروگرم از هر نمونه استفاده شد و از هر دو نوع رنگآمیزی کوماسی بلو R-250 و Blue Silver Staining استفاده شد.
شکل شماره ۴-۵ متعلق به پروتئینهای غشایی سویههای بیماران مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حساس و مایکوباکتریوم بوویس میباشد بنحوی که lineهای ۱ تا ۵ مربوط به سویه مایکوباکتریوم بوویس و lineهای ۶ تا ۱۰ مربوط به سویه مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حساس میباشد.
درصد ژل ۱۰% و رنگ آمیزی آمیزی کوماسی بلو R-250 استفاده شده است.
- TB M. bovis مارکر
شکل۴-۵: باندهای پروتئینهای غشایی سویههای M.bovis و M.TB، استخراج پروتئین به روش آمونیوم سولفات، ژل ۱۰% و رنگ آمیزی آمیزی کوماسی بلو R-250
شکل شماره ۴-۶ نیز متعلق به پروتئینهای غشایی میباشد که درصد ژل ۱۰% اما از رنگآمیزیBlue Silver Staining استفاده شده است، بنحوی که lineهای ۲ تا ۶ مربوط به سویه مایکوباکتریوم بوویس و lineهای ۷ تا ۱۱ مربوط به مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حساس میباشد.
- TB B. bovis
