۵/۰

۵/۰

۵/۰

۱/۰

۱۱

۵/۰

۱/۰

۵/۰

۱/۰

۱/۰

۱/۰

۱۲

۹/۰

۵/۰

۵/۰

۵/۰

۱/۰

۱/۰

جدول۳- ۵- طرح آزمایش بر اساس مقادیر واقعی
برای این ١٢ آزمایش طراحی شده ،١٢ارلن انتخاب شد و در داخل هر یک از ١٢ارلن آب مقطر اضافه شد و مقادیر مشخص شده در جدول برای فنل ، آمونیوم سولفات ، سدیم کلرید ، پپتون ، مخمر و منیزیم سولفات به ترتیب اضافه شدو ارلن های محتوی نمونه ها در داخل اتوکلاو در دمای ١٢١درجه سانتی گراد استریل شدند وباکتری ها در کنار شعله درهر یک از این محیط ها ،کشت داده شدندو سپس هرکدام را در دمای ٣٠درجه سانتی گراد به مدت ٢۴ساعت در داخل انکوباتور قرار گرفت.برای هر نمونه شاهدی در نظر گرفته شد.سپس در دستگاه اسپکتروفتومتر جذب نوری نمونه در طول موج ۶٠٠نانومتر خوانده شد.

٣-۶-٢-بهینه سازی آماری به روش RSM:
با این روش می توان اثرات اصلی را بر رشد باکتری و تجزیه فنل ارزیابی نمود.طراحی مرکب از ۴ متغیر مستقل شامل آمونیوم سولفات (_۱C)، غلظت فنل (_۲C)، Hp (_٣C)، دمای انکوباسیون (_۴C) تشکیل گردید.برای هر فاکتور نسبت به صفر ، مقادیری تعیین گردید که به آن ها مقادیر کد شده اتلاق می گردد.با بهره گرفتن از این ۴ فاکتور و ۵ سطح کد شده، ٣٠ آزمایش طراحی گردید(جدول٣-٨و٣-٧).داده های حاصل از آزمایش در معادله با بررسی اثرات هر فاکتور به تنهایی و اثرات متقابل هر متغیر، پیشگویی گردید.معادله ٣-۲-
در این معادله پاسخ پیش بینی شده ( به شکل واحد (U) بیان می گردد)، _۰a ثابت مدل ، _ia ضریب خطی، _iia اثرات مربع (هر متغیر) ، _ija اثرات متقابل _وiC _وjC و… متغیرها هستند. از این معادله برای بهینه سازی مقادیر پارامترهای مستقل تاثیر گذار بر پاسخ استفاده می شود.
برای تعیین آنالیز رگرسیون چندگانه و ترسیم پلان سطح پاسخ و انجام آنالیز واریانس از نرم افزار Minitab استفاده شد(۴٨).
٣-۷-تعیین صحت مدل سطح پاسخ
بدین منظور پس از تعیین بهترین مقادیر (طی پیشگویی نرم افزار) رشد باکتری و تجزیه فنل به طور تجربی مورد آزمایش قرار گرفت و نتایج حاصله با نتایج پیشگویی مورد مقایسه قرار گرفت.
٣-٨-آنالیز آماری
نتایج به صورت انحراف معیار mean±SD ارائه شد.احتمال٠۵/٠ p< از نظر آماری معنادار تلقی گردید(۴٩).
جدول ٣-۶- مقادیر کد شده و حقیقی در روش طراحی آزمایش RSM

فاکتور کد

واحد

-۲

-۱

۰

۱

۲

Ammonium sulfate

)g/l)

۰.۰۵

۰.۲۰

۰.۳۵